摘要　目的: 观察冬虫夏草(虫草) 对人成纤维细胞ICAM -1 及CD₁₂₆表达的影响, 探讨虫草抗肝纤维化的机制。方法: 采用细胞培养法, 于培养液中加入不同浓度的冬虫虫草。通过流式细胞仪观察经分子探针标记的ICAM -1 及CD₁₂₆阳性细胞数。结果: 正常培养条件下, 人成纤维细胞表达ICAM -1、CD₁₂₆阳性率分别为(86.63±5.94)%和(77.95±4.68)% , 虫草能明显抑制其表达。结论: 冬虫虫草能抑制成纤维细胞表达某些细胞粘附分子, 这可能是其抗肝纤维化机制之一。
关键词　冬虫夏草; 成纤维细胞; CD₁₂₆; ICAM -1
中图分类号　R285. 6
EFFECTSOF CORDYCEPS SINENSISON ICAM-1 AND CD126 EXPRESSION IN HUMAN FIBROBLASTS
W ang Yaojun,Q uan Q izhen, Sun Ziqin, et al (Department of Gastroenterology, General Hosp ital of J inanM ili2tary Region, 250031)
ABSTRACTObjective: To observe the effects of cordycep s sinensis on ICAM -1 and CD₁₂₆ exp ression in humanfibroblasts and to exp lore anti2fibrotic mechanism s of Cordycep s sinensis. Methods: D ifferent dosage of Cordy2cep s sinensisw as added to the cultural fibroblasts. Positive rate of ICAM -1 and CD₁₂₆w as assessed by using flowcytometry. Resul ts: The positive rate of ICAM -1 and CD₁₂₆ in normal cultural fibroblasts w as ( 86.63±5.94)%and (77.95±4.68)% respectively. It decreased in cultural fibroblastsw ith Cordycep s sinensis. Conclusion:Cordycep s sinensis can inh ibit the immune2adhensive function of fibroblasts,w h ich may be one of the anti2fi2broticmechanism s of Cordycep s sinensis.
KEY WORDS　Cordycep s sinensis; fibroblasts; ICAM -1; CD₁₂₆　　
作者曾报道冬虫夏草(虫草) 能抑制人成纤维细胞的增殖、分裂及生长, 并有抑制其合成Ⅲ 型胶原及透明质酸的作用。笔者观察虫草对培养人成纤维细胞表达细胞间粘附分子ICAM -1 及CD₁₂₆的影响,以探讨虫草抗肝纤维化机制。
1　材料和方法
1.1　材料　人胚肺成纤维细胞(HFL ) 由中国科学院上海细胞生物学研究所提供, RPM I-1640 培养基为Gibco 产品。异硫氰酸荧光素标记的鼠抗人细胞间粘附分子(CD₅₄-F ITC)、鼠抗人白介素6 受体(CD₁₂₆-F ITC) 均为单克隆抗体, Immunotech 产品;FACScan 流式细胞仪系美国BD 公司产品。
1.2　方法
1.2.1　细胞培养方法: 见文献。
1.2.2　流式细胞仪检测方法: 培养的HFL 加入虫草后再培养48 h, 倒置显微镜观察细胞形态变化;收集细胞后以70% 乙醇固定, 调整细胞数为1×10⁶/m l, 室温下加入CD₅₄-F ITC、CD₁₂₆-F ITC 反应20 m in; 再加二抗, 2000 r/m in 离心5 m in, 以PBS缓冲液冲洗离心2 次, 弃上清以清除未结合的荧光抗体。经流式细胞仪收集2 万个细胞, 荧光强度以对数放大, 光散射数据存软盘, 测试完后在M acintosh650 计算机上用Cell Q uest P lot 软件分析数据, 由HP 1200c/PS 打印结果。统计学采用F 检验。
2　结果
成纤维细胞表达ICAM -1、CD₁₂₆以CD₅₄、CD₁₂₆阳性率来表示(正常培养条件下阳性率分别为(86.63±5.94)%、(77.95±4.68)% )。各浓度虫草培养的成纤维细胞ICAM -1、CD₁₂₆表达受到明显抑制(P < 0.01, 表1)。
 
3　讨论
肝纤维化过程中储脂细胞起着极其重要的作用, 大多数学者认为储脂细胞是限定于特殊组织结构即肝窦周间隙中的成纤维细胞。目前, 储脂细胞、成纤维细胞成为肝纤维化细胞学研究的热点。ICAM 1 是近年发现的一种细胞粘附分子, 它具有与淋巴细胞功能相关抗原-1 (L FA -1) 结合的能力, 它们的结合有利于免疫介导肝疾病炎性细胞的聚集并促进细胞从血管内移入狄氏间隙。免疫组化显示, 在正常肝组织仅窦周细胞、门脉血管内皮细胞有少量ICAM -1 表达, 而肝炎、肝硬化组织ICAM -1 表达增加, 且成纤维细胞、肝细胞亦表达阳性, 这种表达与细胞因子如IL -1、TN Fα等刺激有关。本结果证实成纤维细胞有ICAM -1 表达, 冬虫夏草能抑制ICAM -1 表达。我们推测, 虫草抗纤维化机制可能与抑制成纤维细胞表达ICAM -1, 从而减轻ICAM -1诱导的炎性细胞在狄氏间隙聚集有关。
CD₁₂₆系L -6 受体。L -6 能刺激储脂细胞增殖并合成胶原、层粘素及蛋白多糖, 在肝炎肝纤维化病理过程中起着重要作用。L -6 在肝脏疾病中有明显升高, 但L -6 受体即CD₁₂₆在肝病中的报道甚少。本结果显示培养的人成纤维细胞有CD₁₂₆表达,其阳性率为(77.95±4.68)%。实验所用各浓度虫草均能抑制CD₁₂₆的表达, 但以高浓度组为强。肝纤维化时L -6 发挥生物学功能需通过L -6 受体, 即CD₁₂₆而起作用。虫草抑制CD₁₂₆6表达可能是其抗肝纤维化的另一机制。结合我们以前细胞培养的研究结果 , 对虫草抗纤维化的机制可归纳如下: ①抑制人成纤维细胞的增殖、分裂及生长; ②抑制成纤维细胞合成Ⅲ 型胶原及透明质酸; ③抑制成纤维细胞表达ICAM -1, 减轻肝脏炎症; ④抑制CD₁₂₆表达, 减弱细胞因子L -6 对成纤维细胞的刺激。
参考文献（略）