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| 长期HBV携带者IFN-γ的诱生和TNF-α的检测 |
| 时间: 2007-08-25 13:05:19 来源: 中国免疫学杂志1996年12卷 作者: 点击: 7972 |
摘 要:应用免疫放射量度分析和ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法分别检测了６８例长期ＨＢＶ携带者ＰＢＭＣ诱生ＴＮＦ－γ和ＴＮＦ－α的含量。结果表明：①ＨＢＶ无症状携带者和肝炎携带者诱生ＩＦＮα活性显著低于正常对照（Ｐ〈０．０５或０．０１）；②肝炎携带者血清和培养上清中ＴＮＦ－α的含量均高于正常对照和无症状携带者，而无症状携带者诱生ＴＮＦ－α的含量又比对照组低；③各组的ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α之间相关性检验无显著意义。提示：长期HBV携带者诱生ＩＦＮ－γ和TNF－α的能力异常，可能是导致HBV长期携带原因之一。
关键词:乙型肝炎病毒 携带者 γ干扰素 肿瘤坏死因子
乙型肝炎病毒(HBV)长期携带者存在免疫应答和免痉调节功能异常γ干扰索(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)由免痉活性细胞产生，具有多种生物活性，是细胞因子网络中的重要组成成份，在抗病毒免痉和免疫调节方面发挥着重要作用。已有文献报道，在急慢性己型肝炎患者IFN-γ和TNF-α产生异常 。本文直用我室建立的IFN-γ免疫放射量度分析技术，检测了68例长期HBV携带者末梢血单个棱细胞(PBMC)诱生IFN-γ的水平，同时应用ELISA 双抗体夹心法检测了TNF-α的含量，井分祈了两者的关系。
1 材料与方法
1．1 研究对象
1．1．1 无症状携带者
46例均为隐性感染，HmAg阳性，肝功(GPT)多次检查均为正常。病程均在2年以上。平均4年3个月，最长者11年。男26例。女20例，年龄19~44岁。HBeAg阳性者11例。
1．1．2 肝炎HBV携带者
22例均有明确感染史，HBsAg阳性，16例肝功(GPT)有异常。临床诊断慢活肝(CAH)10例，慢迁肝(CPH)6例，另外6例急性发病治疗后肝功一直保持正常，病程均在2年以上，平均4年5个月，最长20年。男13例，女9例，年龄20～50岁。HBeAg阳性者8例。
1．1．3 正常对照组
15例均接种过HBV 疫苗，HBsAg阴性，5例HBsAb阳性。男8例，女7例，年龄在18~39岁之间．
1．2 PBMC的分离
无菌抽取盒血10ml于含有甲基纤维紊和肝素抗凝的空针内，混匀，竖直静置15～ 20min，推去下层红细胞，取富含淋巴细胞层用Ficoll-Hypaque分离PBMCtD-Hanks液洗3次，细胞悬浮于含10％小牛血清RPMI1640(Gibco)培养液内(加2mmol／L 谷氨酰胺，5×10 -2mmol／L 2-ME，HEPES10 mmol／L ，100U／ml青、链霉素)，调整细胞浓度为2×106／ml，备用。
1．3 IFN-γ和TNF-α的诱生
取PBMC悬液加入24孔培养板内，分别加入Con-A(Fhka)和LPS(OSSB5，第二军医大学檄生物教研室提供)，使其终末浓度分别为5μg／ml和10μg／ml，细胞浓度为1×10 5／ml，37℃5% CO2孵育72h，收集上清，-40℃保存待测。
1．4 IFN-γ的检测
采用我科建立的免疫放射量度分析法。
1．5 TNF-α的检测
采用ELISA双抗体夹心法。试剂盘由军事医学科学院生物制剂发展中心提供。首先绘制出TNF-α标准曲线，在酶标仪上读取490nm 的OD值，根据标准曲线求出待捡样品TNF-α的含量，以ng／ml表示。
2 结果
2．1 HBV长期携带者诱生IFN-γ的活性
结果表明 HBV 无症状携带者和肝炎携带者PBMC诱生IFN-γ的活性显著低于正常对照(P<0.05或0.01)。
2．2 血滑和培养上滑中TNF-α的含量
结果表明-肝炎携带者血滑和LPS刺激后培养上清中TNF-α的含量均显著高于正常对照组耜无症状携带者，而无症状携带者TNF-α的含量又比对照组低(P< 0.01)，见表2。
2．3 IFN-γ的活性与TNF-α含量之间的关系
各组诱生球IFN-γ 活性与TNF-α含量之间相关性检验均无显著意义。
3 讨论
免疫活性细胞产生细胞因子是其发挥免疫效应的机理之一。在病理情况下，免疫活性细胞产生或诱生IFN-γ和TNF-α的功能发生异常，标志机体免疫功能紊乱，有文献报道，在HBV 感染者血清或PBMC诱生IFN-γ和TNF-α活性改变。
IFN-γ主要由活化的T淋巴细胞和NK细胞产生，能够增强巨噬细胞的抗病毒活性。IFN-γ还可增强多种细胞膜表面分子的表达，发挥重要的免疫调节作用。本文采用免疫放射量度分析法检测HBV长期携带者PBMC诱生IFN-γ的活性。结果表明，长期HBV 携带者PBMC产生IFN-γ能力低下。造成这种低下的原因还不清楚。可能与HBV感染PBMC，影响IFN-γ的分泌，或其它细胞因子如IL-2和sIL-2R表达异常，间接影响球IFN-γ的产生。
TNF可分为α和β两种：TNF-α主要由巨噬细胞产生，有人发现CD4+T细胞也能诱生TNF-α；TNF-β又称为淋巴毒索，主要由T 和B细胞产生 。在正常情况下，体内TNF-α浓度很低．其有调节免疫应答，促进细胞生长分化等多种生物功能。在病理状态下，由于病毒感染细胞，导致机体免疫网络水平失调，TNF-α水平随浓度增高，介导局部炎症反应，加重器官损害。本文结果表明：肝炎HBV携带者血清和PBMC诱生TNF-α的含量均高于正常对照和HBV 无症状携带者，说明TNF-α可能参与HBV感染后的发病过程。然而无症状携带者组TNF-α与正常对照组无差异(血清)或低下(刺激上清)。造成TNF-α产生异常的原因还不完全清楚，可能与肝炎HBV携带者休内单核巨噬细胞活性及数量相对增多有关，也可能与细胞园子-受体网络失调有关。
IFN-γ和TNF-α在抗病毒免疫应答中具有协同作用。IFN-γ可增强TNF-α的应答反应和巨噬细胞转录TNF-α的mRNA．通过诱导TNF受体蛋白的合成，增强TNF膜受体的表达。也有报遭NK细胞产生IFN-γ需要TNF-α。本文分析了HBV长期携带者PBMC产生IFN-γ和TNF-α之间的相关性表明两者无显著意义。这可能是多种因素作用的结果，需要进一步研究。
[参考文献]（略） |
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