 |
公司新闻 |
|
 |
| 冬虫夏草对大鼠试验型肝纤维化的防治作用及其机理研究 |
| 时间: 2007-08-23 12:57:17 来源: 中国中药杂志1996年第21卷第3期 作者: 点击: 7588 |
肝纤维化是各种慢性肝病发展为肝硬变的必经病理过程，有资料表明这一病理过程是可以逆转的。然而对肝纤维化的治疗，目前国内外尚无有效药物。冬虫夏草(下称虫草)有一定的抗纤维化作用，但确切疗效和机理尚不清楚本文观察虫草对CCI4 诱发的大鼠肝纤维化的疗效，并对其机理进行研究，以期为临床治疗提供理论依据。
1 材料和方法
1．1 材料
Wistar大鼠48只，雄性，体重l60～280g，由山东省医科院提供。Ⅰ型腔原抗体由日本广岛大学医院山本正美惠赠，兔抗牛Ⅲ型前胶原肽由第二军医大学长征医院提供，鼠抗人结蛋自、Ⅳ型胶原单克隆抗体均为Dako公司产品，ABC试剂盒为Vector产品。Ⅲ型前胶原(PCⅢ)放免试剂盒由重庆肿瘤研究所提供。虫草为市售天然正品虫草，经山东中医学院中药鉴定教研室王长墉教授鉴定为麦角苗科真菌冬虫夏草Cordyceps sinensis(Berk．)Saec．，研碎制成混悬水溶液。
1．2 方法
1．2．1 动物处理 随机分为2组，每组24只。治疗组：皮下注射40% CCl4花生油溶液1.2ml／kg体重，每周2次，共12周，实验开始时给予虫草1.0g／只，灌胃，每周3次，共14周 对照组注射CCI4同治疗组，生理盐水灌胃每次每组6只动物分别于实验第4，8，12，14 周处死，取肝组织及动物血清。并行常规病理学检查
1．2．2 血清PCⅢ放免测定严格按试剂盒要求操作。
1．2．3 免疫组化染色 I，Ⅲ，IV型胶原、结蛋白免疫组化染色均采用ABC法，详细步骤见文献 。结蛋白阳性细胞计数及统计方法参考文献 。
1．2．4 电镜标本制作 肝组织经4% 戊二醛冷固定2h后，Epon812包埋，超薄切片，电镜下观察肝储脂细胞(FSC)形态及数量变化。
2 结果
2．1 血清PCⅢ变化
治疗组动物血清PCⅢ在实验第4，8，12，14周均显著低于相应对照组(P<0.01)，见表1。
2．2 肝组织病理学变化
在实验各期，治疗组肝细胞浊肿变性、脂肪变性、炎细胞浸润及纤维组织增生均显著轻于对照组。对照组肝组织在早、中期(第4，8周)常见肝细胞点状坏死和局灶性坏死，而治疗组极少见到。第12周对照组肝组织即有完整的纤维膈形成并见少数假小叶(图1)，14周有大量假小叶形成，此时肝大体解剖呈小结节状肝硬变。而治疗组第12周纤维增生达高峰，但无完整纤维分隔，14周尚可见纤维组织吸收减少，以汇管区减少明显(图2)。
2．3 肝组织结蛋白阳性细胞变化
结果见表2。
2．4 肝组织I，Ⅲ，Ⅳ型胶原变化
I，Ⅲ型胶原主要分布于汇管区及纤维组织增生区，少量分布于窦周，Ⅳ型胶原主要分布于肝窦周 治疗组在实验各期。I，Ⅲ，Ⅳ型胶原沉积均轻于对照组，在第8周对照组肝组织可见靠近肝界板处的肝细胞内有Ⅳ型胶原，治疗组则未见肝细胞内有IV型胶原。
2．5 肝组织FSC超徽结构变化
第4周对照组FSC增多、体大、胞浆丰富、内含多个脂滴，治疗组数量较少。第8周对照组肝内见大量FSC，浆内脂滴减少，粗面内质网、线粒体及高尔基器发达，部分细胞转化为肌成纤维细胞，胞浆内可见大量胶原纤维(图3) 治疗组虽增生活跃，但粗面内质网、线粒体及高自基器欠发达， 无肌成纤维细胞。第12～14周，对照组肝内FSC多转化为肌成纤维细胞和成纤维细胞(图4)。治疗组较少见到肌成纤维细胞和成纤维细胞。
3 讨论
血清PCⅢ能敏感地反映肝纤维化的病理变化并可作为肝纤维化活动及动态变化的观察指标。虫草治疗组血清PCⅢ明显低于对照组。病理结果也显示治疗组肝细胞变性、坏死、纤维组织增生明显轻于对照组，且实验晚期仍无完整纤维隔及假小叶形成 免疫组化结果显示治疗组Ⅰ,Ⅲ，Ⅳ型胶原在肝组织中的沉积亦轻于对照组。充分证实了虫草又确切的抗肝纤维化作用。
FSC是位于肝窦狄氏间隙的成纤维细胞系细胞 ，纤维化时它转化为肌成纤维细胞，表达胶原mRNA功能增强，并合成大量Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ型胶原 这些胶原成分沉积使肝窦毛细血管化，是肝纤维化的分子病理学基础 。光镜下鉴别FSC最可靠的依据是它含有结蛋白。实验第12，14周治疗组肝组织结蛋白阳性细胞数明显少于对照组，第4，8周两组之间虽无统计学差别，但可看出治疗组明显低于对照组，这说明虫草能抑制结蛋白阳性细胞即FSC增殖。超微结构观察结果提示虫草不仅抑制FSC增殖，还能抑制FSC向肌成纤维细胞及成纤维细胞转化。因此我们推测虫草抗肝纤维化的主要机理可能是它能抑制FSC增殖和向肌成纤维细胞、成纤维细胞转化，从而减弱FSC合成胶原的能力。
免疫组化结果还提示虫草能抑制肝细胞合成Ⅳ型胶原。病理结果提示虫草有减轻炎症反应、保护肝细胞的作用，可能在肝纤维化防治中也起一定作用。这方面的机理尚需进一步研究。
4 参考文献（略） |
 |
|
|
|
