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| 虫草多糖对人外周血IL-2、IL-2R及IFN-γ调节作用的研究 |
| 时间: 2007-08-23 12:58:10 来源: 《上海免疫学杂志》1995年第15卷第6期 作者: 点击: 8052 |
摘要：本研究观察了冬虫夏草多糖(cordyceps polysacchride．CP)对体外培养的外周血琳巴细胞(PBL)的IL-2、IL-2R、IFN-γ的影响。结果表明，CP可单独或协同PHA诱导IL-2R的表达，促进可溶性IL-2R(sIL-2R)的生成，但对PHA诱生的IL-2、IFN-γ活性有选择性抑制作用。其协同或抑制作用均呈剂量依赖性，吲哚美辛可部分或全部消除其抑制效应。提示CP对体外培养的PBL具有双向免疫调节作用。
关键词：冬虫夏草 IL-2 IL-2R IFN-γ
冬虫夏草(简称虫草，Cordycepssinensis Sacc)是传统的强壮滋补中药。免疫药理研究表明，它对机体具有多方面免疫调节活性，如能明显促进单核-巨噬细胞的增殖和吞噬功能，刺激小鼠腹腔粘附细胞分泌高滴度的IL-1，增强体液免疫和NK细胞活性等，但关于它对T细胞功能，尤其是IL-2、IL-2R及IFN-γ的影响，尚未肯定。本研究应用其免疫调节的活性成份之一虫草多糖(CP)对人外周血淋巴细胞(PBL)进行诱导培养，以观察CP对PBL的IL-2R表达 IL-2和IFN-γ诱生活性的影响，并对其作用机理进行了初步探讨。
1 材料和方法
1．1 药物和试剂
虫草多糖：由上海同济大学张泳教授提供。磨细后用蒸馏水溶解，调pH 至7．2，8磅20min高压灭菌，用RPMI1640培养液稀释成一系列浓度。
1．2 PBL分离和诱导培养
抽取健康志愿者空腹静脉血若干ml，按常规分离PBL．并配成浓度为2×106／ml的细胞悬液。每份标本分为以下几组，加人24孔细胞培养板，1ml／孔 依次加药后,置5％CO 2、37℃ 培养箱中诱导培养48h后，继而离心取上清测IL-2、IFN-γ活性及sIL-2R水平，细胞测IL-2R表达率。
1．2．1 PHA 对照组 含PHA-P(Sigma公司)10μg／ml。
1．2．2 CP组 分别含CP 0.01、0.1、1.0、10.0、50.0、100.0μg／ml。
1．2．3 CP+PHA组 浓度同上。
1．2．4 PHA+ 吲哚美辛(indomethacin，IND)组 IND(石家庄第一制药厂)浓度为2.5μg／ml，PHA浓度同上。
1．2．5 PHA+CP+IND组 浓度同上。
1．3 IL-2R 表达率的测定 间接免疫荧光一流式细胞仪分折法，参见文献。
1．4 IL-2活性测定 MTT比色法，参见文献。
1．5 IFN-γ活性测定法 ABC-ELISA 法，参见文献。
1．6 sIL-2R 测定 ELISA 法，参见文献。
2 结果
2．1 CP对体外培养的PBL的IL-2R表达，IL-2及IFN-γ生成的诱导作用
结果显示CP可诱导IL-2R 的表达,促进sIL-2R的生成，但不能诱导可检测量的IL-2和IFN-γ。CP对IL-2R诱导作用与药物剂量呈正相关系，在CP浓度为50μg／ml时，其作用与10μg／ml的PHA-P相当，随着浓度的降低，CP的作用逐渐减弱(表1)。
2．2 CP对PHA-P诱导IL-2R表达的协同作用
结果显示，CP可促进PHA-P对IL-2R的诱导，其表达率与CP浓度在一定范围内有显著的正相关性(r=0．872，P<0．05)。此外，随IL-2R表达的增加，sIL-2R的生成亦显著增加(表2)。
2．3 CP对PHA-P诱导PBL生成IL-2、IFN-γ的抑制作用
实验结果与促进IL-2R的表达相反，CP对IL-2、IFN-γ的诱生则呈抑制作用。其抑制率与CP浓度之间是“S”型曲线关系(图1)。在CP浓度为100μg／ml时，几乎可完全抑制PHA-P对IL-2和IFN-γ的诱生，随着药物浓度的降低，这种抑制作用逐渐减弱至消失。
2．4 IND对CP作用的影响在应用PHA．P和CP对PBL诱导时，加入微量IND(终浓度为2.5μg／ml)。结果显示，IND 可使IL-2、IFN-γ的诱生活性分别提高。2.5和2.1倍左右，并可部分或全部消除CP对IL-2 、IFN-γ生成的抑制作用，但对IL-2R的表达则无明显影响(图2)。
3 讨论
曾有研究表明，虫草可显著增强T细胞功能，诱导大鼠淋巴细胞表面分子CD4、CD8、CD25(IL-2R)的表达，刺激小鼠胸腺细胞增殖，提高小鼠脾淋巴细胞E花结形成率。在临床上应用CP及其脂质体(CPL)治疗慢性乙型肝炎和肝炎后肝硬化患者，可使患者的细胞免疫功能(NK细胞活性、CD4／CD8比值、IL-2和IFN-γ活性等)明显提高。但在试管和动物实验中亦有许多相反的报道，认为虫草及人工菌丝可抑制IL-2的生成及IL-2与IL-2R的结合。本研究结果表明，CP对体外培养的PBL具有双向免疫调节活性。CP既可单独或协同PHA-P诱导PBL的IL-2R表达，但对PHA-P诱导的IL-2、IFN-γ的生成则有选择性抑制作用。这种与体内实验相矛盾的现象，我们推测可能与CP的剂量效用、体内外环境的差别及机体免疫状态有关。
本实验结果显示CP对IL-2、IL-2R呈两种相反方向作用，推测其原因如下：(1)CP在促进IL- 2R表达的同时，sIL-2R 生成也增加，封闭了IL-2的作用，从而抑制IL-2与IL-2R的结合，减低IL-2活性，这在体内可控制过度的免疫应答而维持体内免疫稳定，在体外则可表现为IL-2活性的低下。(2)在诱导IL-2R表达的同时，可能诱导其他一些细胞因子如pGE2的产生。pGE2是一种免疫抑制因子，可诱导抑制性T细胞(Ts)抑制IL-2和IFN-γ的生成。本实验发现，加用IND后，IL-2和IFN-γ诱生活性成倍增加，并可部分或全部消除CP的抑制作用，亦证明了这一点。(3)CP的剂量效用：本实验结果表明，CP对IL-2R表达的促进作用及对IL-2和IFN-γ生成的抑制作用均星显著的剂量依赖性。在高浓度(>50ug／ml)时，CP几乎完全抑制PHA-P诱导的IL-2和IFN-γ的生成，随着浓度的降低，这种抑制作用逐渐减弱至消失，但其对IL-2R的表达，仍有一定的促进作用。联系体内实验的结果，可见CP对机体细胞免疫，尤其是T细胞功能呈调节性影响。根据其剂量和机体免疫状态的不同，有使免疫功能增强或减弱的双向调节作用。
参考文献（略） |
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