摘要 本文采用人工虫草菌丝对大鼠白蛋白免疫损伤性肝纤维化进行治疗，并用有一定抗纤化作用的秋水仙碱作为阳性对照。结果表明：人工虫草能减轻肝脏的炎性细胞浸润和肝细胞变性环死：同时能抑制总胶原、I、Ⅲ 型胶原在肝内的沉积，并可使已形成的胶原重新溶解和吸收，其作用与秋水仙碱相仿，本文验证了人工冬虫夏草的抗纤维化作用并对可能的机理进行了探讨。
关键词 肝纤维化资料 白蛋白 免疫损伤 人工虫草菌丝 I、Ⅲ型胶原
肝炎后肝硬化在我国具有很高的发病率，目前尚缺乏有效方法延缓或逆转此过程的发展。本文旨在探讨免疫调节剂冬虫夏草对肝纤维化的治疗作用，从而为临床应用提供理论依据。
材料和方法
一、动物模型制备及实验过程Wistar大鼠120只，雌雄各半，参照我室方法制成肝纤维化模型。预防组在模型制各中间(尾静脉攻击注射同时)给药，而治疗组则在模型制备完毕后再给药．同时设立模型对照组和正常对照组。
二、药物制备及给药方法
人工虫草菌丝制成1g/ml溶液，给与动物灌胃1g／100g／d，秋水仙碱参照成人量1mg／d，按公斤体重折合为人的七倍量则为0.014mg／100g／d。
三、取材及标本处理分别于模型制备中间(尾静脉攻击注射同时、模型制备完毕时及模型制备后2.5个月取肝活检、光镜标本甲醛固定，常规制片后光镜观察。电镜标本经戊二醛、锇酸固定后、树脂包埋、铀一铅双染色后JEM1200EX电镜观察。
四、免疫组化染色
标本采用ABC法染I、Ⅲ型胶原、间接免疫荧光法染免疫复合物。
五、图像分析
I、Ⅲ 型胶原染色切片，每组选择5张，每张随机选取10个视野，计算胶原占肝组织的面积百分比。
六、病理组织学判定标准
根据肝脏纤维组织的增生程度，参考国外有关文献，将肝纤维化和肝硬化分为6级。0级：正常肝组织；I级：少量胶原纤维自汇管区或中央静脉向外延伸；Ⅱ级：纤维延伸明显，但未包绕整个肝小叶；Ⅲ级：纤维互相连接包绕整个肝小叶；IV级：纤维分割肝小叶形成假小叶。但以大方形假小叶为主；V级：假小叶中大方形假小叶和小圆形假小叶各占50 ；Ⅵ级：肝内布满小圆形假小叶，其间充满粗大增生的纤维组织。
结 果
一、常规HB染色
人工虫草预防组及治疗组肝组织内炎性细胞浸润和肝细胞变性坏死均较模型组为轻．秋水仙碱组也有同样结果。
二、根据Masson染色中亮绿着色部位观察总胶原增生情况，按照上述分析标准得出以下结果。
㈠各预防组无论用药2.5个月或5个月，其胶原增生均少于模型组(P<0.05)；但秋水仙碱组与人工虫草组相比差异无显著性(P>0.05)；两药用药5个月效果均优于2.5个月(P<0.05)。
㈡两治疗组用药2.5个月后．其胶原增生均少于模型组(P<0.05)．两治疗组相比差异无显著性(P>0.05)。
三、I、Ⅲ 型胶原图像分析
㈠预防组用药5个月I、Ⅲ型胶原占肝组织面积比(%)，见表1。
两预防组I、Ⅲ型胶原增生均较模型组为轻(P<0.05)，但两预防组之间及I、Ⅲ 型胶原之间无明显差别。
㈡治疗组用药2.5个月I、Ⅲ型胶原占肝组织面积比(% )，见表2。
两药治疗组I、Ⅲ型胶原均较模型组为少(P<0.05)，但治疗组之间，I、Ⅲ 型胶原之间无明显差别。
四、免疫复合物染色
模型组免疫复合物(IgG-IC)沉积于纤维化肝脏的血管及胆管周围并沿纤维隔、肝窦壁均匀分布。人工虫草组的IgG-IC沉积量明显减少，只限于纤维隔及周围的少量肝窦表面，大部分肝组织内的肝窦表面无沉积。秋水仙碱组IgG-IC无明显减少。
五、电镜观察
模型组可见肝细胞萎缩、线粒体肿胀、嵴稀少、血窦内可见浆细胞、淋巴细胞浸润、枯否细胞胞浆带变窄、呈不活跃状态，纤维隔附近肝细胞微绒毛减少。人工虫草组肝细胞萎缩较模型组为轻，枯否细胞胞浆带增宽，充满吞噬体呈活跃状态，纤维隔及血窦附近浆细胞、淋巴细胞浸润减少。
讨 论
一、冬虫夏草的抗肝纤维化作用
我们采用人工虫草菌丝对大鼠免疫损伤性肝纤维化进行预防和治疗作用的研究，发现它可明显减少大鼠肝内总胶原、I、Ⅲ 型胶原在肝内的沉积，对已形成的胶原也有一定的溶解和吸收的功效：人工虫草治疗过的肝脏其炎性细胞浸润、肝细胞坏死均较模型组为轻、枯否细胞，功能明显增强，IgG-IC在肝内沉积也显著减少。因此，冬虫夏草抗纤维化作用可能与下列因素有关：① 提高吞噬细胞或枯否细胞的吞噬活性，增加NK细胞功能，从而有力地清除进入机体的抗原及形成的免疫复合物，抑制了免疫反应引起的细胞坏死和炎症反应及一系列细胞因子的释放和Ito细胞的激活，从而减少胶原分泌。② 冬虫夏草可能增加胶原酶的活性，使胶原溶解或再吸收。国内报道冬虫夏草菌丝可增加血吸虫性肝纤维化动物及病人肝脏胶原酶的活性，本文治疗组的抗纤维化作用可用此来解释。人工虫草对肝炎、肝纤维化的治疗可能是多途径的，其丰富的氨基酸含量可能与提高血清白蛋白有关，对HBsAg转阴作用，可能与提高机体免疫功能、加强病毒清除有关。因此冬虫夏草是治疗肝炎、肝硬化的一个值得推广的药物．应更深人加以研究。
二、动物模型的特点
本文采用由王宝恩首先在国内创立的以人血清白蛋白为抗原的免疫复合物损伤型肝纤维化动物模型 它具有以下特点：① 肝纤维化形成率高；② 病变局限于肝脏；③ 发病机制中有免疫机理参与；④ 自然恢复慢，病变可至少持续270天。此模型形成机理可能为：外源异种血清反复刺激机体产生抗体，抗原-抗体复合物沉积于肝窦和血管壁，激活补体，引起炎性细胞浸润并释放溶酶体酶、TNF、IL-1等细胞因子，引起细胞损伤。目前认为肝细胞损伤和炎症是诱发胶原增生的始动因索，从而激活Ito细胞而分泌胶原 此模型与CCI4损伤模型比较时发现本模型主要引起Ⅲ 、Ⅳ型前胶原mRNA的增生。而CCI4模型却有明显的TGF-β和I型前胶原mRNA的增加，其机理尚待探讨。本模型在肾小球、肺间质均可见到IgG-IC沉积，但相应部位均未见胶原增生，可能这些部位缺乏类似于Ito细胞的细胞成份。总之，此模型因有免疫因素参与而便于研究炎性细胞及细胞因子在肝纤维化发生中的作用及Ito细胞激活和胶原分泌的调节作用，且因其自然恢复慢，而便于长期药物观察。
参考文献（略）
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